平時在實驗室常聽到的一句話就是“今天某某試驗沒做好是為什么？今天某某試驗沒出結(jié)果是什么原因？今天某某試驗為什么會是這樣的呢？” 等等。

然后仔細一查找原因，往往是由于操作上面的不認(rèn)真，或是一些小小的細節(jié)沒有注意到。以下是集各路朋網(wǎng)友的一些實戰(zhàn)經(jīng)驗，在此與大家分享：

1. 跑page膠的時候

小電壓跑會避免高電壓產(chǎn)生的熱量爾導(dǎo)致的膠層變形。低電壓泳道會比大電壓泳道跑的直一些，且分離效果更高，有利于分子量相差不大的蛋白分離。

2. 提取質(zhì)粒的時候

后一步的酒精揮發(fā)很關(guān)鍵，基本上是其后續(xù)的酶切反應(yīng)的決定性因素。所以這一步盡量揮發(fā)長一點時間，是空調(diào)吹熱風(fēng)，或是37度溫箱放長一點的時間，我試過室溫過夜，酶切很好。

3. 做WESTERN BLOT 的時候

大家往往會摸索一抗、二抗的濃度，封閉時間，曝光時間等等，而每次變換其中的一個條件就需要從新跑膠、轉(zhuǎn)膜，甚至重新提蛋白，這樣會浪費大量的時間。其實*沒有必要這樣。一次轉(zhuǎn)膜后，將PVDF膜晾干，裁減成小塊，保存起來，用的時候取出一塊，沒有任何影響。這對于摸索條件的戰(zhàn)友來說，節(jié)約了大量的時間。

4. 有關(guān)緩沖液和培養(yǎng)基配置

1)將緩沖液配方中的成分分別以10-100倍配成母液儲存，需要的時候只需將相應(yīng)的母液混合，補加水稀釋即可。

2)配培養(yǎng)基時通常會忘記各成分的量，如配LB時的三個成分不記得到底哪個是5g，哪個要10個，因此可以在常用的試劑瓶的標(biāo)簽上注明所需的量，如配LB時，在NaCl瓶外注明10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等，很方便，不需要每次配之前臨時翻書。

5. 有關(guān)PCR主反應(yīng)液配置

在做克隆鑒定的時候經(jīng)常需要在酶切鑒定前進行PCR鑒定，每次配置PCR反應(yīng)液很繁瑣，可以將其配置類似kit的形式，按你需要的反應(yīng)體系列表，然后放大100倍配置100×主反應(yīng)液(100次反應(yīng))，其中含buffer，Mg2+，dNTPs，但不含引物和Taq酶，然后可以10×分裝或一管儲存在-20度，在需要的時候拿出融開，然后按所需的PCR反應(yīng)個數(shù)吸取相應(yīng)的倍數(shù)，再補加相應(yīng)反應(yīng)倍數(shù)的Taq和引物，混勻后分裝，這樣做的好處如下：

1)可極大的節(jié)省寶貴的時間，可早點收工，看球；

2)避免每次反應(yīng)加樣不均的可能；

3)大大減少PCR假陽性的產(chǎn)生。

6. 有關(guān)酶切反應(yīng)液的配置

在做酶切時，也可以象PCR一樣配置主反應(yīng)液，每次反應(yīng)前先列好反應(yīng)的體系，算好需要的反應(yīng)數(shù)，然后按所需反應(yīng)的體系按所需反應(yīng)數(shù)放大，加入buffer、酶、水，質(zhì)粒欄空缺，然后混合后按除質(zhì)粒DNA的體積分裝，然后再在每管中加入相應(yīng)體積的質(zhì)粒DNA酶切，這樣做的好處如下，特別是當(dāng)同時有10幾個陽性克隆需要鑒定時尤為明顯：

1)各反應(yīng)成分均一；

2)可大大減少限制型內(nèi)切酶的使用；

3)節(jié)省時間。

7. 有關(guān)SDS－PAGE：

1)可將SDS-PAGE的積層膠，分離膠預(yù)先配好大體積如100ml儲存在4度冰箱(注：10%AP，TEMED不加，切記!!!)，每次配置時只需吸取相應(yīng)體積的預(yù)制膠加入AP，TEMED即可，沒必要每次制膠時候翻分子克隆，特別方便，而且，這樣的預(yù)制膠可儲存半年以上，不失為偷懶的方法;更關(guān)鍵的是可大大減少與丙稀酰胺的接觸，因此大大減少中毒的機會。2)電泳時雖然小電泳分離效果要好一些，但2小時以上的等待的時間實在是痛苦，因此可以提高電泳至150V，但需要將整個電泳槽放在放滿冰水的臉盆里散熱，這樣跑出來的膠分離效果絲毫不比低電壓來的差，關(guān)鍵是時間大大節(jié)省，不需1h即可看結(jié)果了。